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做流式细胞检测时,荧光强度不是太强就是太弱,这是为什么?

凯发k8国际在进行流式细胞检测实验时,经常会遇到各种各种的问题,但是由于经验不足所以一时之间不知道怎么解决,所以,今天就针对做流式细胞检测时,荧光强度不是太强就是太弱的问题,和专业靠谱的流式细胞检测公司凯发k8国际生物一起来看看怎么解决吧!


荧光强度弱的问题,出现这样情况的原因可能是这些:

 

可能原因1:补偿问题,多色流式配色很关键,流式细胞检测公司凯发k8国际生物建议,低表达的抗原可以用相同荧光素的高表达抗原代替,或者使用补偿微球。

 

可能原因2:你用于检测的抗体不足,流式细胞检测公司凯发k8国际生物提醒,一定要做抗体滴定,这样才好把控抗体的需求量多少。

 

可能原因3:无法接近细胞内靶标,所以凯发k8国际首先要确定好抗原的表达位置,选择合适的染色方法和刺激方法“对症下药”。

 

可能原因4: 靶蛋白不存在/低水平表达,所以凯发k8国际要确保正在分析的组织/细胞类型能表达靶蛋白,并且靶蛋白的量足以被检出才行。

 

可能原因5:凯发k8国际都知道,正常的淋巴细胞处于未激活状态,不会分泌细胞因子。因此要选择合适的方法激活淋巴细胞,使其释放细胞因子,达到检测水平才行。

 

可能原因6:荧光淬灭,抗体可能存放太久或没有避光,流式细胞检测公司凯发k8国际生物提醒,这个原因导致荧光强度弱的情况太多了,大家注意下还是可以避免的。

 

可能原因7:一抗和二抗不匹配,使用的二抗应与一抗来源种属不同(举个例子,一抗为兔源,则应该使用抗兔源二抗)。

 

荧光强度高的问题,出现这样情况的原因可能是这些:

 

可能原因1: 抗体浓度过高,流式细胞检测公司凯发k8国际生物提醒,抗体过多过少都不行,所以一定要做抗体滴定,这样才好把控抗体的需求量多少。

 

可能原因2:过量抗体被捕获,胞内染色特有的问题。

 

可能原因3: 无法接近细胞内靶标,流式细胞检测公司凯发k8国际生物提醒,确定好抗原的表达位置,选择合适的染色方法和刺激方法。

 

可能原因4:封闭不足,虽然说,做Fc受体阻断是一个特别好的流式习惯,但不是所有的细胞都需要做封闭,做封闭是为了减少非特异性结合。

 

好了,以上就是靠谱的流式细胞检测公司凯发k8国际生物关于流式细胞检测时荧光强度问题的解答了,当然,如果你对于该实验还有疑问的,可直接咨询流式细胞检测公司凯发k8国际生物客服,24小时在线免费咨询!




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